原代細胞培養實驗注意事項詳解

（1）原代培養材料的選擇，盡量選取繁殖能力較強的組織，如胚胎、幼小的生物體或者腫瘤組織等。

（2）要注意無菌操作。其操作要求應高于外科手術

（3）整個取材操作要迅速，尤其孕鼠浸泡乙醇時間1min左右，不能過長，以確保胚胎細胞活性。

（4）運用消化法時胰酶溫度應低于37℃，濃度只需平時消化細胞濃度的一半。因為此過程不像消化培養細胞時的1~10min，而是至少20min，先消化下來的細胞在此胰酶消化液中繼續消化了10min以上。所以胰酶不能作用過強，否則這些細胞易被損傷而不易生存。

（5）如使用組織塊法，則應待組織塊略干燥，能黏附于瓶壁時再使之與培養液接觸，匆使組織塊漂浮起來。如果組織塊沒有黏壁，則細胞不易生長，即使生長也因沒有貼在瓶壁上，從而因不能觀察到而無法收集到生長的細胞。

（6）原代培養操作時，也可以使用未添加血清的DMEM或PBS洗滌子宮、胚胎或組織塊等。

（7）本實驗也可以使用新生乳鼠做培養材料。此時要將乳鼠浸入75%乙醇2~3min使皮膚充分消毒，由于乳鼠原代培養污染概率更高，故應小心操作，避免污染細菌。乳鼠原代培養細胞的存活率不及胚胎細胞培養的成功率。

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