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BV2細胞異常生長形態解析及解決方案
發布時間： 2022-01-06 點擊次數： 5925次BV2
常用的小膠質細胞模型，它用攜帶v-raf/v-myc基因的逆轉錄病毒（J2）感染原代小膠質細胞而獲得永生化。BV2細胞表達非特異性酯酶活性，它具有吞噬性能力，并缺乏過氧化物酶活性。這種細胞不僅會分泌溶菌酶，在適當的刺激下，還會分泌白細胞介素1和腫瘤壞死因子。
此外，BV2細胞還表現出自發的抗念珠菌活性，用干擾素-Y處理后獲得殺腫瘤活性。
從表型上看，BV2細胞對MAC1和MAC2抗原呈陽性，而對MAC3、膠質纖維酸性蛋白（GFAP）和半乳糖核苷（GC）抗原呈陰性[1]。
圖A. BV2細胞顯微照片，bar=30 μm.
圖B. 通過掃描電鏡觀察，在玻璃蓋板上培養的BV2細胞，bar=5 μm.
圖C. 通過透射電鏡觀察，BV2細胞的部分細胞質吞噬iCA，bar=3 μm.
（圖片引用自文獻[1]）
在培養BV2細胞的時候，同學們最常遇到的問題就是生長形態異常。生長形態異常往往伴隨著細胞生長緩慢、細胞死亡等，導致實驗做不出結果，給大家帶來重重困擾。
小普根據多年的實驗經驗，為大家整理了這一現象可能發生的原因，及相應解決方案。
首先我們來看看正常的BV2形態。結合眾多文獻和Procell的細胞圖片來看，BV2是一種半貼壁半懸浮細胞，它的形態并不規則，存在圓形和梭形兩種。
懸浮細胞為圓形，貼壁細胞既有圓形也有梭形。由于圓形細胞折光率高，它的邊緣看起來是發亮的；梭形細胞則向兩端伸出黑色突起。
（圖片源自Procell）
那么，異常生長的BV2細胞有哪些形態呢？
如何根據不同的異常生長形態，調整改善培養條件，及時解決問題？
小普總結如下：
形態1：細胞全部飄起，*不貼壁
解析：分為培養基偏堿及復蘇后不貼壁兩種情況。
（1）培養基偏堿。培養瓶不透氣或者開封時間過長，培養基PH將增大，可見培養基呈紫紅色。BV2對培養基酸堿度較為敏感，在偏堿培養基中培養數小時后將會全部飄起。
解決方案：給細胞換上新鮮配制的培養基，并使用透氣瓶。
（2）復蘇后不貼壁。需要檢查凍存或復蘇操作過程，以及培養基是否存在問題。
解決方案：確保凍存前狀態良好及凍存復蘇操作規范，使用新鮮配制的培養基，即可解決問題。
形態2：細胞形態變為阿米巴樣
解析：小膠質細胞是一種可塑性*的細胞，可通過特定因素激活，從而發揮其免疫功能。從靜息態變為激活態的過程中，小膠質細胞形態也隨之發生改變。
實驗中常用細菌脂多糖（LPS）和干擾素-γ（IFNγ），分別模擬細菌和病毒感染，來刺激小膠質細胞激活。受到刺激的小膠質細胞突起縮短變厚，胞體增大，呈現阿米巴樣（如下圖所示）。
但有的時候BV2形態變化并不明顯，還需要結合其他實驗，如檢測NO、IL-13等炎癥因子的表達，來確定BV2是否被定向激活。
（圖片引用自文獻[2]）
如果細胞沒有受到任何刺激，就已經呈現阿米巴樣，或者受刺激后，炎癥因子表達沒有差異，那么細胞有可能發生了自分化。
其原因可以從以下幾點考慮：
（1）存在潛在微生物污染，刺激細胞自分化。
解決方案：通過去掉培養基中的抗生素確定污染類型，并排查污染源頭。
（2）使用的胎牛血清內毒素高，內毒素刺激細胞自分化。
解決方案：嘗試使用超低內毒素胎牛血清，或許能得到改善。
形態3：全都是分枝狀細胞，圓形細胞少
解析：這種形態往往伴隨著細胞生長慢或生長停滯的情況。由于圓形細胞增殖速度較快，在圓形細胞缺失的狀況下，整體增殖速度就會減慢。
解決方案：由于BV2是一種半貼壁半懸浮細胞，貼壁和懸浮細胞的比例并不固定，當懸浮細胞較多時，換液和傳代時要將懸浮細胞收集，避免圓形細胞的大量損失。
總而言之，BV2細胞的形態、生長狀態與其生長環境息息相關，給細胞以最合適的環境，嚴格按照要求規范操作，細胞也將用好的狀態回報你。
參考文獻：
[1] PubMed=2110186; DOI=10.1016/0165-5728(90)90073-V.
Blasi E., Barluzzi R., Bocchini V., Mazzolla R., Bistoni F.
Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus.
J. Neuroimmunol. 27:229-237(1990)
[2] PMID=31590042 ; DOI=10.1016/j.molimm.2019.09.020.
Zhang J, Zheng Y, Luo Y, Du Y, Zhang X, Fu J.
Curcumin inhibits LPS-induced neuroinflammation by promoting microglial M2 polarization via TREM2/ TLR4/ NF-κB pathways in BV2 cells.
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