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raw 264.7巨噬細胞表面蛋白酶的表達解析
發布時間： 2025-10-16 點擊次數： 220次提起巨噬細胞，人們常想到它“吃掉”病原體的場景。raw 264.7巨噬細胞更像一位多才多藝的指揮官：一邊吞噬，一邊把多種蛋白酶擺到細胞膜外，剪切、激活或降解周圍的蛋白質，從而引導炎癥走向。要想知道這些“分子剪刀”何時出現、出現多少，就得先過三關：分離、標記、定量。一、分離常用的來源是腹腔灌洗液：向大鼠腹腔注射預冷PBS，輕輕按摩后回抽，可獲得＞85%純度的巨噬細胞。若需組織原位巨噬細胞，則把肝或脂肪墊剪碎，用膠原酶Ⅳ消化30min，再通過CD11b+F4/80+磁珠或流式分選，就能拿到“三陽性”群體。二、標記膜蛋白酶多為跨膜或糖基錨定蛋白，如基質金屬蛋白酶-14（MT1-MMP）、CD26、ADAM17等。用熒光抗體標記時，需先在4℃下做Fc受體阻斷，避免非特異結合；隨后與抗體孵育45min，即可上機檢測。若目標豐度低，可采用生物素-鏈霉親和素二次放大，信號可再增5-10倍。三、定量流式細胞術給出的僅是相對熒光強度。要換算成每個細胞的抗原數，可借助定量微球標準曲線：微球預先偶聯已知量的抗小鼠IgG，與樣本同行染色，通過熒光強度-分子數標準曲線，即可把MT1-MMP的“平均熒光2570”換算為“約1.8×10?分子/細胞”。如此，不同實驗批次的數據就能橫向比較。場景舉例：腹膜透析模型中MMP-12的時空表達一項研究用高糖腹透液持續刺激大鼠，第7天即可檢出腹膜巨噬細胞表面MMP-12顯著上調；到第28天，其mRNA水平升高4.3倍，膜定位蛋白增加2.1倍，提示長期刺激促使細胞把更多MMP-12送到膜外，參與腹膜膠原重塑。從腹腔灌洗到流式定量，只需三步，就能把巨噬細胞“誰、何時、多少”表達膜蛋白酶說得清清楚楚。掌握這套流程，我們就能在膿毒癥、組織纖維化或腫瘤微環境中，追蹤免疫應答的“剪刀手”們如何剪出炎癥的結局。
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