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探討無血清培養(yǎng)基的一些主要補充因子

發(fā)布時間： 2022-11-07　　點擊次數(shù)： 1461次

　　無血清培養(yǎng)基是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養(yǎng)基加少量血清所配制的全培養(yǎng)基可以滿足大部分細胞培養(yǎng)的要求，但對有些實驗卻不適合，如觀察一種生長因子對某種細胞的作用，這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子；又如需要測定某種細胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)（抗體、生長因子）的能力；或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物。因此研制出無血清培養(yǎng)基一直是生物科學工作者努力的目標。
　　補充因子是代替血清的各種因子的總稱。多數(shù)無血清培養(yǎng)液必須補加3-8種因子。胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白是必須補充因子，其他多數(shù)為輔助作用的因子。按其功能不同，補充因子可分為以下五類：
　　1.激素和生長因子
　　很多細胞用無血清培養(yǎng)時需要加?激素，如胰島素、生長激素、胰?糖素等。胰島素是重要的細胞存活因子，與細胞上的胰島素受體結(jié)合后可促進RNA、蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成，抑制細胞凋亡。此外，雌?醇、孕酮等也是無血清培養(yǎng)基中常添加的補充因子。
　　2.結(jié)合蛋白
　　常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。轉(zhuǎn)鐵蛋白與細胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合是細胞獲取鐵元素的主要來源。白蛋白與脂類、激素、維生素、?屬離子和生長因子結(jié)合后可調(diào)節(jié)上述物質(zhì)在無血清培養(yǎng)基中活性的作用，此外，由于牛血清白蛋白?般添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護細胞免受機械損傷。
　　3.貼壁因子
　　許多細胞必須貼壁才能生長，這種情況下無血清培養(yǎng)基中?定要添加促貼壁和擴展因子，?般為細胞外基質(zhì)，如纖粘連蛋白、膠原蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖粘連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化，這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞、CHO細胞等。
　　4.酶抑制劑
　　培養(yǎng)貼壁生長的細胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養(yǎng)基中不可少須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。
　　5.其他補充因子
　　?些細胞培養(yǎng)使用的無血清培養(yǎng)基還需要補充微量元素、維生素、脂類等低分子量物質(zhì)。

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