植物細胞的活體染色與死活鑒定

2. 切下一片較幼嫩的洋蔥鱗片，用單面刀片在鱗片內側割劃成0.5cm2左右的小塊，用尖頭鑷子將內表皮小塊輕輕撕下，即可投入中性紅溶液染色（注意應將表皮內側向下）。若用小麥葉片為材料，可將葉片背面朝上平放在載玻片上，再將此載玻片放入盛有少量清水的培養皿內，用左手將葉片按平，右手用刀片從一個方向輕輕刮去下表皮和葉肉部分，只留下透明的上表皮細胞。當刮到只剩下少量葉肉細胞時要十分小心，用力太重容易損傷表皮細胞，甚至只剩下一層細胞壁，太輕又會留下過多的葉肉細胞，影響觀察。除小麥外其他禾本科植物也可用此法制備表皮細胞，將刮好的材料切成約0.5cm2小塊。

3. 將制好的洋蔥鱗莖內表皮或小麥葉片上表皮小塊投入0.03%的中性紅溶液中染色5~10min，取出1~2片，在蒸餾水中稍加沖洗，在載玻片上滴一滴蒸餾水，小心地將制片平展到載玻片上，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察，可看到細胞壁被染成紅色，而原生質和液泡均不染色，這是因為蒸餾水偏酸，在弱酸性條件下細胞壁帶負電荷和染料陽離子發生吸附的結果。

4. 將步驟3中的活體染色制片取出幾片放入pH略高于7.0的自來水中浸泡10~15min，再置于載玻片上鏡檢，將發現細胞壁脫色，而液泡卻被染成深紅色，這是因為在溶液pH高于7.0的情況下，中性紅分子的解離作用很弱，主要以分子狀態存在，不易被細胞壁吸附，但較易透過質膜和液泡膜進入液泡，而植物的細胞液多呈酸性反應，進入液泡的中性紅于是發生解離，將液泡染成櫻桃紅色。此時細胞核和原生質不染色。

為了確證中性紅染色部位，可將上述洋蔥內表皮染片浸入1mol/L的硝酸鉀溶液中浸泡10min左右，然后取出觀察。由于硝酸鉀能使原生質強烈膨脹，發生“帽狀質壁分離"，因而能清楚地區別開無色透明的原生質和染成紅色的液泡。

5. 將步驟4中的活體制片放在酒精燈火焰上微微加熱，以殺死細胞，再在顯微鏡下觀察，會看到原生質凝結成不均勻的凝膠狀，與細胞核一起被染成紅色。

6. 在活體染色制片中仔細尋找，可能看到個別死細胞，其細胞核因被中性紅染色而呈紅色，清晰可辨。