我的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實驗效率低，怎么辦？

脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染實驗指的是，脂質(zhì)包裹待轉(zhuǎn)染DNA形成復合體，與細胞膜融合或內(nèi)吞，進入細胞。然而，大量的脂質(zhì)體-DNA復合體，只有一小部分能運送到細胞質(zhì)并進入細胞核中。

如何提高脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染效率的關鍵，就在這一步：提高復合體進入細胞質(zhì)的效率。

1、避免使用陰離子試劑，使用新一代聚陽離子試劑，適用范圍廣，毒性相較以前的脂質(zhì)試劑小。

2、使用陽離子脂質(zhì)與DNA的*佳比例，以及一定數(shù)量細胞的陽離子脂質(zhì)用量。可向購買試劑的公司進行詢問。

這是因為過量的脂質(zhì)容易受到培養(yǎng)皿中其他帶電荷物質(zhì)的干擾，如細胞外基質(zhì)中的硫酸軟骨素。

3、待轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細胞應該從凍存庫中重新培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染過程中，細胞在匯合狀態(tài)不應超過24小時，單層細胞應處于對數(shù)中期。

4、轉(zhuǎn)染過程中，培養(yǎng)基不建議加入抗生素。轉(zhuǎn)染試劑使細胞通透性增加，進入細胞的抗生素濃度增加，會產(chǎn)生一定的細胞毒性。

5、某些血清蛋白可能會干擾脂質(zhì)體-DNA復合體形成，因此應在無血清狀態(tài)下形成復合體，后續(xù)過程可添加血清。

6、提高待轉(zhuǎn)染基因的純度，DNA的260nm：280nm應為1.8 。